關(guān)于酶標(biāo)板性能檢驗(yàn)的詳細(xì)說明

　　

　　一、酶標(biāo)板透光率均一性

　　隨機(jī)抽取5塊96孔板，用酶標(biāo)儀設(shè)置雙波長（主波長450nm,參考波長630nm）檢測OD值，根據(jù)OD值（OD值=OD450-OD630）計(jì)算出各孔的透光率T（吸光度A=-lgTT為透光率）。再計(jì)算出CV值（CV=標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值）。

　　

　　二、儀器：酶標(biāo)儀、微量移液器（加樣槍）、8通道移液器（排槍）（不一定需要）、旋渦混勻器、微型離心機(jī)、生化培養(yǎng)箱。

　　

　　三、材料、試劑

　　蒸餾水

　　0.05MpH=9.6碳酸鹽（CBS）緩沖液

　　正常人IgG（sigma，10mg/支）

　　BCA微量蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒

　　

　　四、操作步驟：

　　1、復(fù)溶正常人IgG（sigma，10mg/支）

　　新到的正常人IgG（sigma，10mg/支），離心，使干粉聚到瓶底，瓶內(nèi)加入1ml蒸餾水，充分溶解、混勻，得到10mg/ml的IgG溶液。

　　備注：為保存抗體活性，應(yīng)置-20℃凍存。為避免反復(fù)凍融造成的活性下降，復(fù)溶后盡量分裝凍存。

　　2、配制正常人IgG濃度為50ug/ml的包被液，溶劑為0.05MpH=9.6碳酸鹽（CBS）緩沖液。

　　3、計(jì)算所需包被液的體積V，理論上V=需包被孔數(shù)×100ul/孔，但實(shí)際上應(yīng)至少要多配300ul，原因：①后面檢測液體蛋白質(zhì)濃度時(shí)要檢測包被前包被液蛋白質(zhì)濃度；②包被時(shí)損耗。包被孔數(shù)：考慮節(jié)約，每塊板可以只包被幾個(gè)孔，如果有幾批不同工藝的待檢測酶標(biāo)板，每批抽兩塊板檢測，每塊板包被幾排孔。

　　4、計(jì)算需要的10mg/ml的IgG的體積V1=(V×30ug/ml)÷10mg/ml。

　　5、計(jì)算需要的CBS的體積V2=V-V1

　　6、取V2體積的CBS，加入V1體積的10mg/ml的IgG，混勻，制得包被液。

　　備注：包被液盡量現(xiàn)配現(xiàn)用，可置2-8℃短期保存。

　　7、包被。用移液器每孔加入100ul包被液。加液完成后，用透明膠帶封閉板孔，置4℃冰箱包被過夜。

　　8、蛋白吸附能力檢測：BCA試劑盒。

　　9、配制標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液

　　10、將5mg/mlBSA標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋到40ug/ml。

　　配制2.5ml40ug/mlBSA：20ul5mg/mlBSA+2480ulCBS,混勻。